实时荧光定量PCR(Ouantitative Real-time CR)是在聚合酶链反应(PCR)中加入荧光染料或英光探针,利用荧光信号累实时检测整个PCR反应进程的仪器。广泛应用在分子诊断,分子生物学研究,动植物检疫以及食品安全检测等领域。
其原理是激光或LED等光源发出的光经过特殊设计的激发干涉滤光片后,经过反应杯并激发其中的荧光基团,荧光基团发出的荧光通过经匹配设计的发射干涉滤光片后被光电探测器接收。
每个反应循环收集一次数据,通过实时扩增曲线,准确地确定CT值,从而根据建立的标准曲线利用CT值确定DNA起始拷贝数做到了真正意义上的DNA定量。PCR巧妙地把核算扩增与杂交,光谱分析和实时检测技术结合在一起,利用荧光信号来检测PCR产物。
滤光片在实时荧光定量PCR中起到重要作用,它们用于选择性地透过特定波长的荧光信号,以确保只有与所用荧光染料特定波长相对应的信号被检测。
具体来说,实时PCR系统通常配备有多个不同波长的荧光检测通道,每个通道都有相应的滤光片。这些滤光片的作用是只允许特定波长的荧光信号通过,而阻止其他波长的光信号进入检测器。这样,可以分别监测不同荧光染料所发出的信号。
实时荧光定量PCR检测仪滤光片应用和特点:
多通道检测: 实时PCR系统中的滤光片通常设计为多通道,能同时检测多种目标序列或多种荧光标记,使实验更高效。
定量测量: 通过合理选择荧光染料和相应的滤光片,可以实现对PCR扩增产物的准确定量。
多用途应用: 这些滤光片可以适用于不同类型的PCR实验,如定量PCR、定性PCR等,也可以用于多种实验目的,如基因表达分析、变异检测等。
提高信噪比: 通过使用合适的滤光片,可以降低背景信号,提高检测的信噪比,从而增强PCR反应的准确性和灵敏度。
实时荧光定量PCR中的滤光片在确保准确检测和定量PCR产物方面发挥关键作用,为分子生物学研究和临床诊断提供了有力的工具。